規格：T25；T75；T175（均經(jīng)過(guò)TC處理）

PART1：細胞懸液接種到培養瓶

1.細胞懸液混勻：按照實(shí)驗要求的濃度準備細胞懸液，并在培養基瓶、培養瓶或其他容器中混勻。

2.使用移液管或巴氏吸管將細胞懸液緩慢且平穩地注入細胞培養瓶中，避免液體濺出或產(chǎn)生泡沫。（對于多層細胞培養瓶，需要特別注意液體的均勻分布，可以通過(guò)傾斜、旋轉等方式使液體均勻流入各層）。

3.將培養瓶輕輕放置于平穩的工作臺上，確保光滑平整一面朝上，有梯度一面朝下（堆疊設計，方便搬運）。

4.將細胞培養瓶放置在合適的培養箱中，設置適當的溫度（如37℃）、濕度和氣體濃度（如5% CO?）。

5.靜置培養一段時(shí)間，讓細胞在培養瓶中生長(cháng)。

PART2：細胞液的更換

1.移除舊培養液：抽吸培養液時(shí)將瓶身傾斜45度，瓶身光滑一面朝向自己。使用巴氏吸管或移液管輕輕吸出舊的培養液，注意動(dòng)作要輕柔，避免沖落貼壁的細胞。如果培養液中有較多的懸浮細胞或雜質(zhì)，可以先用PBS緩沖液洗滌細胞一至二次，以去除這些雜質(zhì)。

2.加入新培養液：在移除舊培養液后，向培養瓶中加入適量培養液。注意加液時(shí)要從培養瓶的側壁加入，避免直接沖擊細胞貼壁面。同時(shí)，要根據細胞的密度和生長(cháng)速度來(lái)確定加入新培養液的量，以確保細胞能夠正常生長(cháng)。

PART3:細胞的收集

1.移除舊培養基：輕輕抽吸細胞培養瓶中的舊培養液，加入適量的PBS緩沖液輕輕搖晃，以洗去殘留的培養基，確保細胞表面干凈。

2.消化和終止細胞：加入適量胰蛋白酶（≥3ml）進(jìn)行消化2-3min，用含血清的培養基終止胰酶的消化。

3.收集細胞：

用移液管抽吸細胞懸液轉移到離心管中（注意避免產(chǎn)生泡沫），放入離心機中，以適當的轉速（如800rpm）離心5分鐘，使細胞沉淀在離心管底部。

4.收集細胞沉淀：離心結束后，輕輕倒掉離心管中的上清液（注意不要將細胞沉淀倒出）。將離心管中的細胞沉淀收集起來(lái)，根據實(shí)驗需要進(jìn)行后續處理。

PART4：使用場(chǎng)景