規格:T25;T75;T175(均經(jīng)過(guò)TC處理)
PART1:細胞懸液接種到培養瓶
1.細胞懸液混勻:按照實(shí)驗要求的濃度準備細胞懸液,并在培養基瓶、培養瓶或其他容器中混勻。
2.使用移液管或巴氏吸管將細胞懸液緩慢且平穩地注入細胞培養瓶中,避免液體濺出或產(chǎn)生泡沫。(對于多層細胞培養瓶,需要特別注意液體的均勻分布,可以通過(guò)傾斜、旋轉等方式使液體均勻流入各層)。
3.將培養瓶輕輕放置于平穩的工作臺上,確保光滑平整一面朝上,有梯度一面朝下(堆疊設計,方便搬運)。
4.將細胞培養瓶放置在合適的培養箱中,設置適當的溫度(如37℃)、濕度和氣體濃度(如5% CO?)。
5.靜置培養一段時(shí)間,讓細胞在培養瓶中生長(cháng)。
PART2:細胞液的更換
1.移除舊培養液:抽吸培養液時(shí)將瓶身傾斜45度,瓶身光滑一面朝向自己。使用巴氏吸管或移液管輕輕吸出舊的培養液,注意動(dòng)作要輕柔,避免沖落貼壁的細胞。如果培養液中有較多的懸浮細胞或雜質(zhì),可以先用PBS緩沖液洗滌細胞一至二次,以去除這些雜質(zhì)。
2.加入新培養液:在移除舊培養液后,向培養瓶中加入適量培養液。注意加液時(shí)要從培養瓶的側壁加入,避免直接沖擊細胞貼壁面。同時(shí),要根據細胞的密度和生長(cháng)速度來(lái)確定加入新培養液的量,以確保細胞能夠正常生長(cháng)。
PART3:細胞的收集
1.移除舊培養基:輕輕抽吸細胞培養瓶中的舊培養液,加入適量的PBS緩沖液輕輕搖晃,以洗去殘留的培養基,確保細胞表面干凈。
2.消化和終止細胞:加入適量胰蛋白酶(≥3ml)進(jìn)行消化2-3min,用含血清的培養基終止胰酶的消化。
3.收集細胞:
用移液管抽吸細胞懸液轉移到離心管中(注意避免產(chǎn)生泡沫),放入離心機中,以適當的轉速(如800rpm)離心5分鐘,使細胞沉淀在離心管底部。
4.收集細胞沉淀:離心結束后,輕輕倒掉離心管中的上清液(注意不要將細胞沉淀倒出)。將離心管中的細胞沉淀收集起來(lái),根據實(shí)驗需要進(jìn)行后續處理。
PART4:使用場(chǎng)景
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